Ένας σωλήνας φυγοκέντρησης είναι ένας απλός σωλήνας που μπορεί να αντέξει υψηλή περιστροφική ταχύτητα και πίεση, όπως ο διαχωρισμός ορισμένων δειγμάτων και ο διαχωρισμός των υπερκείμενων ιζημάτων.Ο σωλήνας φυγοκέντρησης υπερδιήθησης έχει δύο μέρη παρόμοια με τον εσωτερικό σωλήνα και τον εξωτερικό σωλήνα.Ο εσωτερικός σωλήνας είναι μια μεμβράνη με ορισμένο μοριακό βάρος.Κατά τη διάρκεια της φυγοκέντρησης υψηλής ταχύτητας, όσοι έχουν μικρότερο μοριακό βάρος θα διαρρεύσουν στον κάτω σωλήνα (δηλαδή στον εξωτερικό σωλήνα) και εκείνοι με μεγαλύτερο μοριακό βάρος θα παγιδευτούν στον άνω σωλήνα (δηλαδή στον εσωτερικό σωλήνα).Αυτή είναι η αρχή της υπερδιήθησης και χρησιμοποιείται συχνά για τη συμπύκνωση δειγμάτων.
Οι σωλήνες φυγόκεντρου υπερδιήθησης μπορούν συνήθως να χρησιμοποιηθούν χωρίς προεπεξεργασία, αλλά για την επεξεργασία δειγμάτων πρωτεΐνης, ειδικά για διαλύματα αραιής πρωτεΐνης (< 10 μg/ml), ο ρυθμός ανάκτησης της συγκέντρωσης με μεμβράνες υπερδιήθησης συχνά δεν είναι ποσοτικός.Αν και τα υλικά PES ελαχιστοποιούν τη μη ειδική προσρόφηση, ορισμένες πρωτεΐνες, ειδικά όταν είναι αραιές, μπορεί να έχουν προβλήματα.Ο βαθμός μη ειδικής δέσμευσης ποικίλλει ανάλογα με τη δομή των μεμονωμένων πρωτεϊνών.Οι πρωτεΐνες που περιέχουν φορτισμένες ή υδρόφοβες περιοχές είναι πιο πιθανό να συνδέονται μη αναστρέψιμα σε διαφορετικές επιφάνειες.Η προεπεξεργασία παθητικοποίησης στην επιφάνεια του σωλήνα φυγοκέντρησης υπερδιήθησης μπορεί να μειώσει την απώλεια της προσρόφησης πρωτεΐνης στην επιφάνεια της μεμβράνης.Στις περισσότερες περιπτώσεις, η προεπεξεργασία της στήλης πριν από τη συμπύκνωση του διαλύματος αραιής πρωτεΐνης μπορεί να βελτιώσει τον ρυθμό ανάκτησης, επειδή το διάλυμα μπορεί να γεμίσει τις κενές θέσεις προσρόφησης πρωτεΐνης που εκτίθενται στη μεμβράνη και την επιφάνεια.Η μέθοδος παθητικοποίησης είναι να εμποτίσετε τη στήλη με μεγαλύτερο όγκο διαλύματος παθητικοποίησης για περισσότερο από 1 ώρα, να πλύνετε καλά τη στήλη με απεσταγμένο νερό και στη συνέχεια να τη φυγοκεντρήσετε μία φορά με απεσταγμένο νερό για να αφαιρέσετε εντελώς το διάλυμα παθητικοποίησης που μπορεί να παραμείνει στο φιλμ. .Προσέξτε να μην στεγνώσει η μεμβράνη μετά την παθητικοποίηση.Εάν θέλετε να το χρησιμοποιήσετε αργότερα, πρέπει να προσθέσετε αποστειρωμένο απεσταγμένο νερό για να διατηρήσετε το φιλμ υγρό.
Οι σωλήνες φυγοκέντρησης υπερδιήθησης συνήθως δεν μπορούν να αποστειρωθούν και να επαναχρησιμοποιηθούν.Δεδομένου ότι η τιμή ενός μόνο σωλήνα δεν είναι φθηνή, πολλοί άνθρωποι προσπαθούν να τον επαναχρησιμοποιήσουν – η εμπειρία είναι να καθαρίσετε την επιφάνεια της μεμβράνης με απεσταγμένο νερό πολλές φορές και να την φυγοκεντρήσετε μία ή δύο φορές.Ο μικρός σωλήνας που μπορεί να φυγοκεντρηθεί αντίστροφα μπορεί να βυθιστεί σε απεσταγμένο νερό και στη συνέχεια να φυγοκεντρηθεί αντίστροφα για περισσότερες φορές, κάτι που θα είναι καλύτερο.Μπορεί να χρησιμοποιηθεί για το ίδιο δείγμα επανειλημμένα και μπορεί να εμποτιστεί σε απεσταγμένο νερό όταν δεν χρησιμοποιείται, αλλά πρέπει να αποτραπεί η βακτηριακή μόλυνση.Μην αναμιγνύετε διαφορετικά δείγματα.Μερικοί λένε ότι η εμβάπτιση σε 20% αλκοόλ και 1n NaOH (υδροξείδιο του νατρίου) μπορεί να αποτρέψει την ανάπτυξη βακτηρίων και να αποτρέψει την ξήρανση.Όσο η μεμβράνη υπερδιήθησης εισβάλλει στο νερό, δεν επιτρέπεται να στεγνώσει.Ωστόσο, άλλοι λένε ότι θα καταστρέψει τη δομή της μεμβράνης.Σε κάθε περίπτωση, οι κατασκευαστές γενικά δεν υποστηρίζουν την επαναχρησιμοποίηση.Η επαναλαμβανόμενη χρήση θα μπλοκάρει το μέγεθος των πόρων της μεμβράνης του φίλτρου και θα προκαλέσει ακόμη και διαρροή υγρού, η οποία θα επηρεάσει τα πειραματικά αποτελέσματα.
Ώρα δημοσίευσης: Σεπ-05-2022