Αλυσιδωτή αντίδραση πολυμεράσης, συντομογραφία ωςPCRστα αγγλικά, είναι μια τεχνική μοριακής βιολογίας που χρησιμοποιείται για την ενίσχυση συγκεκριμένων θραυσμάτων DNA.Μπορεί να θεωρηθεί ως μια ειδική αντιγραφή DNA έξω από το σώμα, η οποία μπορεί να αυξήσει πολύ μια πολύ μικρή ποσότητα DNA.Κατά τη διάρκεια του συνόλουPCRδιαδικασία αντίδρασης, μια κατηγορία ουσιών παίζει ζωτικό ρόλο – τα ένζυμα.
1. Taq DNA
Σε πειράματα στις πρώτες μέρες τουPCR, οι επιστήμονες χρησιμοποίησαν Escherichia coli DNA πολυμεράση I, Αλλά υπάρχει ένα πρόβλημα με αυτό το ένζυμο: χρειάζεται να αναπληρώνει νέο ένζυμο κάθε φορά που εκτελείται ένας κύκλος, γεγονός που καθιστά τα βήματα της επέμβασης ελαφρώς περίπλοκα και είναι δύσκολο να ενισχύεται πλήρως αυτόματα.Αυτό το πρόβλημα λύθηκε αφού οι επιστήμονες απομόνωσαν κατά λάθος την πολυμεράση Taq DNA από το Thermus aquaticus το 1988. Από τότε, η αυτόματη ενίσχυση του DNA έγινε πραγματικότητα.Η ανακάλυψη αυτού του ενζύμου κάνει επίσηςPCRτεχνολογία μια βολική, πρακτική και καθολική τεχνολογία.Επί του παρόντος, η Taq DNA πολυμεράση είναι η πιο κοινή πολυμεράση σε κιτ DNA.
2. PfuDNA
Όπως αναφέρθηκε παραπάνω, το Taq DNase έχει ένα μεγάλο σφάλμα, επομένως οι επιστήμονες έχουν τροποποιήσει την πολυμεράση Taq DNA σε κάποιο βαθμό, προκειμένου να αποφευχθεί η μη ειδική ενίσχυση λόγω αναντιστοιχίας, με αποτέλεσμα ανακριβή αποτελέσματα δοκιμών.Αλλά η τροποποίηση της Taq DNA πολυμεράσης μπορεί να αναστείλει τη δραστηριότητα της DNA πολυμεράσης σε θερμοκρασία δωματίου.Η πολυμεράση PfuDNA μπορεί κάλλιστα να αναπληρώσει τα παραπάνω μειονεκτήματα της Taq DNA πολυμεράσης, έτσι ώστε η αντίδραση PCR να μπορεί να πραγματοποιηθεί κανονικά και το ποσοστό επιτυχίας της ενίσχυσης του γονιδίου στόχου μπορεί να βελτιωθεί αποτελεσματικά.
3. Αντίστροφη Μεταγραφάση
Η αντίστροφη μεταγραφάση ανακαλύφθηκε το 1970. Αυτό το ένζυμο χρησιμοποιεί RNA ως εκμαγείο, dNTP ως υπόστρωμα, ακολουθεί την αρχή του ζευγαρώματος βάσεων και συνθέτει ένα μονόκλωνο DNA συμπληρωματικό προς το εκμαγείο RNA στην κατεύθυνση 5'-3'.Η ανάστροφη μεταγραφάση εξαρτάται κυρίως από τη δραστικότητα της DNA πολυμεράσης από μήτρες DNA ή RNA και επομένως δεν έχει δραστηριότητα εξωνουκλεάσης 3'-5'.Ωστόσο, έχει δραστηριότητα RNase H, η οποία περιορίζει το μήκος σύνθεσης της ανάστροφης μεταγραφάσης σε κάποιο βαθμό.Λόγω της χαμηλής πιστότητας και της θερμοσταθερότητας της άγριας ανάστροφης μεταγραφάσης, οι επιστήμονες την τροποποίησαν επίσης.
ΓιαPCRπειράματα, τα κύρια αναλώσιμα είναι: μεμονωμένος σωλήνας PCR, σωλήνας PCR 4/8 λωρίδων, πλάκες PCR.
Labio'sΑναλώσιμα PCRέχουν τα εξήςπλεονεκτήματα:
Πλάκες PCR: Ευρεία συμβατότητα θερμικού κυκλωτή.Υψηλής αντίθεσης, εύκολη αναγνώριση καλά.καλά αντανάκλαση φθορισμού;καλήμεταφορά θερμότητας;Πιστοποιημένοι αναστολείς DNase, RNase, DNA, PCR και ελεγμένοι χωρίς πυρετογόνα.
Μεμονωμένοι σωλήνες PCR: Ανθεκτικό στην εξάτμιση, καλόμεταφορά θερμότητας;εξαιρετική οπτική διαύγεια, Πιστοποιημένοι αναστολείς DNase, RNase, DNA, PCR και ελεγμένα χωρίς πυρετογόνα.
Σωλήνες PCR 4/8 λωρίδων: Εξαιρετικά λεπτά τοιχώματα, υψηλή διαύγεια, καλή ανάκλαση φθορισμού.μπορεί να χρησιμοποιηθεί στη φαρμακευτική βιομηχανία, τη βιομηχανία τροφίμων και τη μοριακή βιολογία, υψηλής ποιότητας, παρθένο υλικό PP, πιστοποιημένο DNase, RNase, DNA, αναστολείς PCR και ελεγμένο χωρίς πυρετογόνα.
Ώρα δημοσίευσης: Jun-09-2023